Tipos de HPLC

Cromatografía de reparto o partición líquido-líquido:

Esta técnica se basa en el reparto de los solutos o analitos sobre fases móvil y estacionaria líquidas, inmiscibles entre sí. La separación selectiva de éstos se debe al diferente grado de solubilidad en las diferentes fases.

 A su vez, la cromatografía de partición se puede clasificar en dos tipos según las polaridades relativas de la fase móvil y estacionaria:

Fase normal: cuya fase móvil es apolar y fase estacionaria polar. Adecuada para separar compuestos polares.

Fase reversa o inversa: con fase móvil polar y fase estacionaria apolar. Adecuada para separar mezclas de compuestos orgánicos neutros o cargados de bajo peso molecular.

Cromatografía de adsorción líquido-sólido:

Es aquella que presenta como fase estacionaria un adsorbente sólido, ya sea sílice o alúmina, donde el analito compite con la fase móvil por los sitios de la superficie y su retención se debe a las fuerzas de adsorción. La única variable que altera el coeficiente de partición de los analitos es la composición de la fase móvil.

Cromatografía de intercambio iónico:

Consiste en la separación de moléculas en función de las cargas que poseen gracias a la presencia de una fase estacionaria a modo de matriz insoluble a la que se han unido covalentemente grupos cargados. La afinidad diferencial de los solutos por esos grupos cargados nos permitirá una separación eficaz de los mismos.

Cromatografía de exclusión molecular:

La separación de los solutos en esta técnica se basa en la capacidad del analito de penetrar en los poros de la matriz de la columna, de modo que si la molécula es de un tamaño mayor al poro no experimentan retención y viajan a la velocidad de la fase móvil, mientras que las que sean menores al límite de inclusión de la columna entrarán en la matriz y su tiempo de retención será mayor.

COMPARACIÓN HPLC Y GC

Características de ambos métodos:

– Eficaz, muy selectivo y ampliamente aplicable

– Uso de muestras pequeñas

– Método no destructivo

– Adaptación al análisis cuantitativo

Ventajas de la técnica de HPLC:

– Separación de muestras no volátiles y térmicamente inestables

– Aplicación a iones inorgánicos.

Ventajas de la técnica de CG:

– Rápida

– Alta resolución

– Acoplamiento fácil con espectrometría de masas.

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